Kunskapsbank / Tillverkning
Peptidsyntes: från aminosyra till frystorkad vial
Renheten i en vial avgörs långt innan analysen görs – den bestäms av hur peptiden syntetiserats och renats. Den här artikeln går igenom fastfassyntes (SPPS) steg för steg och förklarar varför vissa sekvenser är svårare att tillverka än andra.
01 / Tillverkning
Fastfassyntes i korthet
Kedjan byggs på ett fast harts, en aminosyra i taget, från C-terminalen mot N-terminalen. Varje aminosyra bär en tillfällig skyddsgrupp som avlägsnas innan nästa koppling.
Eftersom peptiden sitter fast på hartset kan överskott av reagens och biprodukter tvättas bort mellan varje steg. Det är den egenskapen som gör metoden så effektiv jämfört med syntes i lösning.
Fmoc-kemi dominerar i modern syntes eftersom avskyddningen sker under milda basiska förhållanden.
02 / Tillverkning
Varför vissa sekvenser är svåra
Kopplingsutbytet per steg är aldrig exakt hundra procent. I en lång sekvens multipliceras förlusterna, vilket ger så kallade deletionssekvenser – kedjor där en aminosyra saknas.
Aggregationsbenägna sekvenser med många hydrofoba rester kan kollapsa på hartset och blockera reaktiva ändar, vilket sänker utbytet ytterligare.
Det är därför långa och hydrofoba sekvenser i regel är dyrare att framställa till samma renhetsgrad som korta hydrofila peptider.
03 / Tillverkning
Klyvning och rening
Efter sista kopplingssteget klyvs peptiden från hartset, oftast med en syrablandning som samtidigt avlägsnar permanenta sidokedjeskydd.
Råpeptiden fälls ut, torkas och renas med preparativ omvänd-fas-HPLC. Fraktioner samlas och analyseras innan de slås ihop.
Rening är det steg som avgör om materialet når ≥ 99 % renhet. Utan preparativ HPLC hamnar råmaterial typiskt betydligt lägre.
04 / Tillverkning
Frystorkning och fyllning
Renade fraktioner frystorkas till ett vitt till benvitt pulver. En jämn, hel kaka är ett tecken på kontrollerad sublimering.
Fyllningsvikt per vial kontrolleras och deklareras. Det värdet används sedan för koncentrationsberäkning i labbet.
Batchen frisläpps först efter HPLC och masspektrometri, och resultaten sammanställs i ett analyscertifikat.
Frågor & svar
Vanliga frågor
Vad är SPPS?
Solid Phase Peptide Synthesis – fastfassyntes, där peptidkedjan byggs stegvis på ett fast harts så att reagensöverskott kan tvättas bort mellan kopplingarna.
Varför varierar priset mellan olika peptider?
Längre och mer aggregationsbenägna sekvenser ger lägre utbyte per syntessteg och kräver mer omfattande rening, vilket påverkar tillverkningskostnaden.
Hur dokumenteras renheten?
Varje batch analyseras med HPLC och masspektrometri före frisläppning. Renheten dokumenteras till ≥ 99 % och redovisas i batchens analyscertifikat.
Får materialet användas på människa eller djur?
Nej. Allt material säljs uteslutande för laboratorie- och forskningsändamål. Det är inte läkemedel, kosttillskott eller terapeutiskt medel och har inte granskats av Läkemedelsverket.